Ανάπτυξη ραδιοανοσολογικής μεθόδου (RIA) για την απομόνωση, την ανίχνευση και τον ποσοτικό προσδιορισμό των καταλοίπων στιλβενίων (DES, DIEN, HEX) σε ιστούς

PDF (English)
Δημοσιευμένα: Ιαν 31, 2018
DOI: https://doi.org/10.12681/jhvms.15699
Λέξεις-κλειδιά:
RIA στιλβένια DES DIEN HEX ιστοί κρέας
A. Ε. TYRPENOU (Α.Ε.ΤΥΡΠΕΝΟΥ)
Ινστιτούτο Κτηνιατρικών Ερευνών Αθηνών - Ι.Κ.Ε.Α. Εθνικό Ίδρυμα Αγροτικής Έρευνας - ΕΘ.Ι.ΑΓ.Ε
Περίληψη

Μία ακριβής, αξιόπιστη και επαναλήψιμη ραδιοανοσολογική μέθοδος αναπτύχθηκε για τον προσδιορισμό των στιλβενίων (διαιθυλοστιλβεστρολη, διενεστρολη και εξεστρολη) σε ιστούς. Περιγράφονται και διευκρινίζονται διεξοδικά η αρχή της ραδιοανοσομέτρησης, η παραγωγή αντιορού και ο έλεγχος για την ανεύρεση της άριστης αραίωσης για δέσμευση 50%, οι υπολογισμοί για την κατασκευή της καμπύλης αναφοράς και της καμπύλης ελέγχου της διασταυρούμενης αντίδρασης, καθώς και άλλα εξειδικευμένα στάδια της ραδιοανοσομέτρησης. Ο αντιορος αντι-DES που παρήχθη με ανοσοποίηση κουνελιού στις συνθήκες της μεθόδου που τυποποιήθηκε για επίπεδο ευαισθησίας 10 pg/σωλήνα, έδωσε άριστη αραίωση (optimun dilution 50%) 1:4000. Ο αντι-DES ήταν εξαιρετικά ειδικός και με διασταυρωμένη αντίδραση προς την οιστραδιόλη <0.01% και προς την εξεστρολη 9.6%. Τα προβλήματα που συνήθως προκύπτουν από τη μη ειδική προσρόφηση από τον άνθρακα (charcoal blank) κατά την εκτέλεση της δοκιμής RIA, με αποτέλεσμα τη μη επαναλήψιμη καμπύλη αναφοράς της διαιθυλοστιλβεστρόλης, ξεπεράσθηκαν με τη χρησιμοποίηση μεθανολικοΰ ρυθμιστικού φωσφορικού διαλύματος (MeOHiPBS) 20%. Η ανάκτηση του σταδίου της χρωματογραφίας στήλης ήταν >90%, ολόκληρης δε της μεθόδου 65-75%. Η μέθοδος αυτή τυποποιήθηκε σε μυϊκό ιστό μοσχαριών και κοτόπουλων για τον προσδιορισμό των καταλοίπων των στιλβενίων και προτείνεται να χρησιμοποιηθεί ως βασική διαδικασία στην τυποποίηση άλλων μεθόδων ραδιοανοσομέτρησης για τον προσδιορισμό των ορμονικών καταλοίπων στους ιστούς των παραγωγικών ζώων.

Λεπτομέρειες άρθρου
  • Ενότητα
  • Research Articles
Creative Commons License

Αυτή η εργασία είναι αδειοδοτημένη υπό το CC Αναφορά Δημιουργού – Μη Εμπορική Χρήση 4.0.

Οι συγγραφείς των άρθρων που δημοσιεύονται στο περιοδικό διατηρούν τα δικαιώματα πνευματικής ιδιοκτησίας επί των άρθρων τους, δίνοντας στο περιοδικό το δικαίωμα της πρώτης δημοσίευσης.

Άρθρα που δημοσιεύονται στο περιοδικό διατίθενται με άδεια Creative Commons 4.0 Non Commercial και σύμφωνα με την άδεια μπορούν να χρησιμοποιούνται ελεύθερα, με αναφορά στο/στη συγγραφέα και στην πρώτη δημοσίευση για μη κερδοσκοπικούς σκοπούς.

Οι συγγραφείς μπορούν να καταθέσουν το άρθρο σε ιδρυματικό ή άλλο αποθετήριο ή/και να το δημοσιεύσουν σε άλλη έκδοση, με υποχρεωτική την αναφορά πρώτης δημοσίευσης στο J Hellenic Vet Med Soc

Οι συγγραφείς ενθαρρύνονται να καταθέσουν σε αποθετήριο ή να δημοσιεύσουν την εργασία τους στο διαδίκτυο πριν ή κατά τη διαδικασία υποβολής και αξιολόγησής της.

Λήψεις
Τα δεδομένα λήψης δεν είναι ακόμη διαθέσιμα.
Αναφορές
Chapman DI. Radioimmunoassay. Chemistry in Britain 1979, 15:439-447.
Exley D. Steroid determination - then and now. Reprinted from: TIBS. Elsevier/North-Holland Biomedical Press 1979.
Reuvers Th, Rerogordo E, Jimenez R. Rapid screening method for the determination of diethylstilbestrol in edible animal tissue by column liquid chromatography with eletrochemical detection. Journal of Chromatography 1991, 564:477-484.
Hoffmann B, Blietz C. Application of radioimmunoassay (RIA) for the determination of residues of anabolic sex hormones. Journal of Animal Science 1983,57:239-246.
Boison JO, MacNeil JD. New Test Kit Technology. In:Oka H, Nakazawa H, Harada K, Macneil JD (eds), Chemical Analysis for Antibiotics Used in Agriculture. AOAC International, USA, 1995:77-119.
ΟΔΗΓΙΑ 96/23/EK του Συμβουλίου της 29ης Απριλίου 1996, "περί λήψεως μέτρων έλεγχου για ορισμένες ουσίες και τα κατάλοιπα τους σε ζώντα ζώα και στα προϊόντα τους και καταργήσεως των οδηγιών 85/358/ΕΟΚ και 86/469/ΕΟΚ και των αποφάσεων 89/187/ΕΟΚ και 91/664/ΕΟΚ. Επίσημη Εφημερίδα των Ενρωπαϊκών Κοινοτήτων, L125/10.
Jansen EHJM, Stephany RW. Effective control for diethylstilbestrol in cattle in the Netherlands. The veterinary Quarterly 1985,7:35-38.
Jansen EHJM, van de Berg RH, van Blitterswijk H, Both-Miedema R, Stephany RW. A high specific detection method for diethylstilbestrol in bovine urine by radioimmunoassay following high performance liquid chromatography. Food Additives and Contaminants 1985,2:271-281.
Aerts CJM, van Baak MJ. Residue levels of natural steroid hormones in edible tissues of veal calves implanted with IMPLIX BF and the effect on removal of the implant prior to slaughtering. In: Proseedings of the EuroResidue Conference on Residues of Veterinary Drugs in Food. Noordwijkerhout, The Netherlands, 1990:105-109
Commission of the European Communities. Plan for the examination for residues in live animals and fresh meat. Bundesministerium für Gesundheit, Sport und Konsumentenschutz, Austria GZ 39.186/5-III/A/3/1994
Commission of the European Communities. Plan for the examination for residues in live animals and fresh meat. Servicio Nacional de Sanidad Animal, Plan Anual '94 para el Examen de Residuos en Carnes Frescas, Argentina 1994
Commission of the European Communities. Plan for the examination for residues in live animals and fresh meat. National Veterinary and Food Research Institute, Finland 1994.
Commission of the European Communities. Plan for the examination for residues in live animals and fresh meat. EC Directorate-Veterinary Services, Albert Towη Marsa, Malta 1993
Harwood DJ, Heitzman RJ, Jouquey A. A radioimmunoassay for the measurment of residues of anabolic agent, hexoestrol, in tissues of cattle and sheep. J. vet. Pharmacol. Therap., 1980, 3:245-254
Tirpenou AE, Kilikidis SD, Kamarianos AP. Modified method for electron capture gas-liquid chromatographic determination of diethylstilbestrol residues in urine of fattened bulls. J. Assoc. Off. Anal. Chem., 1983,66:1230-1233
Hoffman B. Problems of residues and health risks of anabolic agents with sex hormone-like activities. Proceedings of the Scientific Conference on Growth Promotion in Meat Production. Albert Borschette Conference Centre, Brussels, 1995: 271-296