Μέθοδος εμπλουτισμού σπέρματος κριού σε ζωηρά κινούμενα σπερματοζωάρια

PDF (English)
Pubblicato: Mar 22, 2018
DOI: https://doi.org/10.12681/jhvms.16101
S. G. PIPERELIS (Σ.Γ. ΠΙΠΕΡΕΛΗΣ)
Κλινική Παραγωγικών Ζώων, Κτηνιατρική Σχολή ΑΠΘ
D. Vafiadis (Δ. ΒΑΦΕΙΑΔΗΣ)
Ηνστιτούτο Αναπαραγωγής & Τεχνητής Σπερματέγχυσης, Ιωνία Θεσσαλονίκης
C. Alexopoulos (Κ. ΑΛΕΞΟΠΟΥΛΟΣ)
Abstract

Σκοπός της παρούσας εργασίας ήταν η διεύρυνση της δυνατότητας αξιοποίησης υποβαθμισμένων εκσπερματισμάτων κριών (με ζωτικότητα <70%), που κατά κανόνα απορρίπτονται ως ακατάλληλα. Η βελτίωση της αναλογίας του εκσπερματίσματος σε ζωηρά κινούμενα σπερματοζωάρια (εμπλουτισμός) επιχειρείται με τη χρήση φίλτρου γυάλινων σφαιριδίων κατακράτησης των νεκρών σπερματοζωαρίων. Καθοριστικός παράγοντας για τη διαμόρφωση του φίλτρου θεωρείται η Συνολική Προσφερόμενη Επιφάνεια των Σφαιριδίων (Σ.Π.Ε.Σ.), ανεξάρτητα από το μέγεθος τους. Η πειραματική ομάδα συγκροτήθηκε από τους είκοσι επτά (27) σπερματοδότες κριούς φυλής Χίου του Ι.Α.Τ.Σ. Τα ζώα, ηλικίας 2-6 ετών, στεγάζονταν και διατρέφονταν κάτω από τις ίδιες συνθήκες σε όλη τη διάρκεια του πειραματισμού. Χρησιμοποιήθηκαν τα εκσπερματίσματα
που απορρίπτονταν ως ακατάλληλα για περαιτέρω επεξεργασία από το Ι.Α.Τ.Σ. λόγω χαμηλής ζωτικότητας, αλλά με κινητικότητα και πυκνότητα φυσιολογικές. Ακολουθούσε η διαδικασία ανάμιξης του κάθε δείγματος των 3 ml με προεπιλεγμένη ποσότητα γυάλινων σφαιριδίων (Worf Glasskugeln GmBh, Meinz Germany), διαμέτρου 1.500, 2.000 ή 3.000 μπι, με συγκεκριμένη συνολική επιφάνεια. Ο προσδιορισμός της Σ.Π.Ε.Σ., μιας δεδομένης ποσότητας σφαιριδίων συγκεκριμένης διαμέτρου (απαραίτητη για την διεξαγωγή των πειραματισμών), έγινε με τη χρήση της «αρχής της Άνωσης» του Αρχιμήδη. Αρχικά, για τον έλεγχο της ακρίβειας της υπόθεσης ότι η Σ.Π.Ε.Σ. είναι το καθοριστικό μέγεθος διαμόρφωσης του φίλτρου σφαιριδίων, ως συσκευή υποδοχής του μίγματος σφαιριδίων/εκσπερματίσματος χρησιμοποιήθηκε μια απλή χοάνη με την προσθήκη ενός γυάλινου σφαιριδίου διαμέτρου 5 mm στο στόμιο της για τον έλεγχο της ροής και τη συγκράτηση του φίλτρου. Σε όλα τα δείγματα που ήρθαν σε επαφή με Σ.Π.Ε.Σ. ίσης έκτασης παρατηρήθηκε σημαντική βελτίωση της ζωτικότητας ανεξάρτητα από τη διάμετρο των σφαιριδύον που χρησιμοποιήθηκαν (Ρ<0,05). Στην αξιολόγηση συσκευών τοποθέτησης και συγκράτησης των σφαιριδίων του φίλτρου, εκτός από την απλή χοάνη χρησιμοποιήθηκαν η γυάλινη απιοειδής προχοΐδα και η σωληνωτή διαχωριστική χοάνη. Με τη χρησιμοποίηση γυάλινης απιοειδοΰς διαχωριστικής χοάνης ανακτήθηκε σημαντικά μεγαλύτερος όγκος από εκείνον της χοάνης και της σωληνωτής διαχωριστικής χοάνης (Ρ<0,05).

Για την επιλογή της καταλληλότερης Σ.Π.Ε.Σ. χρησιμοποιήθηκαν σφαιρίδια διαμέτρου 1.500 μιτι, 2.000 μιη και 3.000 μιτι, για τη διαμόρφωση επιφανειών προσκόλλησης σπερματοζωαρίων έκτασης από 16 cm2 έως και 154 cm2 και γυάλινη απιοειδής διαχωριστική χοάνη για την τοποθέτηση τους. Σε όλες τις περιπτώσεις, ο όγκος των δειγμάτων που ανακτήθηκε μετά από τη δίοδο από φίλτρο ήταν σημαντικά μικρότερος συγκριτικά με τον αρχικό (Ρ<0,05). Φίλτρα με Σ.Π.Ε.Σ. σφαιριδίων έκτασης 103 cm2 αποδείχθηκαν τα πλέον αποτελεσματικά με βάση τη συνεκτίμηση όλων τοον παραμέτρων που εξετάστηκαν (ανακτώμενος όγκος εκσπερματίσματος, ζωτικότητα σπερματοζωαρίων και πυκνότητα εκσπερματίσματος) (Ρ<0,05).

Article Details
  • Sezione
  • Research Articles
Creative Commons License

Questo lavoro è fornito con la licenza Creative Commons Attribuzione - Non commerciale 4.0 Internazionale.

Authors who publish with this journal agree to the following terms:

· Authors retain copyright and grant the journal right of first publication with the work simultaneously licensed under a Creative Commons Attribution Non-Commercial License that allows others to share the work with an acknowledgement of the work's authorship and initial publication in this journal.

· Authors are able to enter into separate, additional contractual arrangements for the non-exclusive distribution of the journal's published version of the work (e.g. post it to an institutional repository or publish it in a book), with an acknowledgement of its initial publication in this journal.

· Authors are permitted and encouraged to post their work online (preferably in institutional repositories or on their website) prior to and during the submission process, as it can lead to productive exchanges, as well as earlier and greater citation of published work.

Downloads
I dati di download non sono ancora disponibili.
Riferimenti bibliografici
Ahmad, Ζ., Anzar, M., Shahab, Μ., Ahmad, Ν. and Andrabi, S.M.Η. (2003) Sephadex and sephadex ion-exchange filtration improves the quality and freezability of low-grade buffalo semen ejaculates. Theriogenology 59,1189-1202.
Anzar, M. and Graham, E.F. (1996) Role of sperm motility and acrosome integrity in the filtration of bovine semen. Theriogenology 45,513-520.
Anzar, M., Graham, E.F. and Iqbal, N. (1997) Post-thaw plasma membrane integrity of bull spermatozoa separated with a sephadex ion-exchange column. Theriogenology 47,845-856.
Avdi, M., Banos, G., Stefos, K. and Chemineau, P. (2004) Seasonal variation in testicular volume and sexual behaviour of Chios and Serres rams. Theriogenology 62,275-282.
Bangham, A. and Hancock, J. (1955) A new method for counting live and dead spermatozoa. Nature 176,656.
Brito, L.F.C., Barth, A.D., Bilodeau-Goeseels, S., Panich, P.L. and Kastelic, J.P. (2003) Comparison of methods to evaluate the plasmalemma of bovine sperm and their relationship with in vitro fertilization rate. Theriogenology 60,1539 1551.
Correa, J.R. and Zavos, P.M. (1996) Preparation and recovery of frozen-thawed bovine spermatozoa via various sperm selection techniques employed in assisted reproductive technologies. Theriogenology 46,1225-1232.
D'Alessandro, A.G. and Martemucci, G. (2003) Evaluation of seasonal variations of semen freezability in Leccese ram. Animal Reproduction Science 79,93-102.
Daya, S., Gwatkin, R. and Bissessar, H. (1987) Separation of motile human spermatozoa by means of a glass bead column. Gamete Research 17,375-380.
Foote, R. (2001) Inhibition of sperm motility does not affect live-dead separation of bull sperm by glass beads. Asian Journal of Andrology Sep,3:193-198.
Gastel, T., Bielli, Α., Perez, R., Lopez, Α., Castrillejo, Α., Tagle, R., Franco, J., Laborde, D., Forsberg, M. and Rodriguez-Martinez, H. (1995) Seasonal variations in testicular morphology in Uruguayan Corriedale rams. Animal Reproduction Science 40,59-75.
Gil, J., Lundeheim, N., Soderquist, L. and Rodriguez-Martinez, H. (2003) Influence of extender, temperature and addition of glycerol on postthaw sperm parameters in ram semen. Theriogenology 59,1241-1255.
Henkel, R., Kierspel, E., Stalf, T , Mehnert, G, Menkveld, R., Tinneberg, H.-R, Schill, W.-B. and Kruger, T.F. (2005) Effect of reactive oxygen species produced by spermatozoa and leukocytes on sperm functions in non-leukocytospermic patients. Fertility and Sterility 83,635-642.
Januskauskas, Α., Lukoseviciute, K., Nagy, S., Johannisson, A. and Rodriguez-Martinez, H. (2005) Assessment of the efficacy of Sephadex G-15 filtration of bovine spermatozoa for cryopreservation. Theriogenology 63,160-178.
Kafi, M., Safdarian, M. and Hashemi, M. (2004) Seasonal variation in semen characteristics, scrotal circumference and libido of Persian Karakul rams. Small Ruminant Research 53,133-139.
Larson-Cook, K.L., Brannian, J.D., Hansen, K.A., Kasperson, K.M., Aamold, E.T. and Evenson, D.P. (2003) Relationship between the outcomes of assisted reproductive techniques and sperm DNA fragmentation as measured by the sperm chromatin structure assay. Fertility and Sterility 80,895-902.
Lui, C, Mrsny, R. and Meizel, S. (1979) Procedures for obtaining high percentages of viable in vitro capacitated hamster sperm. Gamete Research 2,207-211.
Mustafa, G., Anzar, M. and Arslan, M. (1998) Separation of motile spermatozoa from frozen-thawed buffalo semen: Swim-up vs filtration procedures. Theriogenology 50,205-211.
Nowakowski, P. and Cwikkla, A. (1994) Seasonal variation in testes size in Polish Merino rams and its relationship to reproductive performance in spring. Theriogenology 42,613-622.
Piperelis, S., Vafiadis, D., Alexopoulos, C. and Boscos, C. ( 2005) Development of a new rapid method for ram semen enrichment. In: 6th International Sheep Veterinary Congress, Krete, Greece, p 269 (Abstr.).
Ralf, R. and Schill, Η. (2003) Sperm preparation for ART. Reprod Biol Endocrinol 1,108.
Rho, G.J., Hahnel, A.C. and Betteridge, K.J. (2001) Comparisons of oocyte maturation times and of three methods of sperm preparation for their effects on the production of goat embryos in vitro. Theriogenology 56,503-516.
Said, T.M., Agarwal, Α., Sharma, R.K., Mascha, E., Sikka, S.C. and Thomas, J., Anthony J. (2004) Human sperm superoxide anion generation and correlation with semen quality in patients with male infertility. Fertility and Sterility 82,871-877.
Valcarcel, A, de las Heras, M.A., Moses, D.F., Perez, L.J. and Baldassarre, Η. (1996) Comparison between Sephadex G-10 and Percoli for preparation of normospermic, asthenospermic and frozen/thawed ram semen. Animal Reproduction Science 41,215-224.
Wang, X., Sharma, R.K., Gupta, Α., George, V., Thomas, J., Anthony J., Falcone, T. and Agarwal, A. (2003a) Alterations in mitochondria membrane potential and oxidative stress in infertile men: a prospective observational study. Fertility and Sterility 80,844-850.
Wang, X., Sharma, R.K, Sikka, S.C., Thomas, J., Anthony J., Falcone, T. and Agarwal, A. (2003b) Oxidative stress is associated with increased apoptosis leading to spermatozoa DNA damage in patients with male factor infertility. Fertility and Sterility 80,531-535.
Williams, A.C. and Ford, W.C.L. (2005) Relationship between reactive oxygen species production and lipid peroxidation in human sperm suspensions and their association with sperm function. Fertility and Sterility 83,929-936.
Windsor, D.P. (1997) Variation between ejaculates in the fertility of frozen ram semen used for cervical insemination of merino ewes. Animal Reproduction Science 47,21-29.
Puoi leggere altri articoli dello stesso autore/i